P2級生物安全實驗室管理操作手冊
說明:P2實驗室是用于初步的生物安全實驗,國標明確了相應要求,適用于對人和環境有中等潛在危害的
微生物.P2 實驗室主要用于初級衛生服務、診斷和研究,其實驗對象的危害等級為Ⅱ級(中等個體危害,
有限群體危害),具體定義為“能引起人類或動物發病,但一般情況下對健康工作者、群體、家畜或環境
不會引起嚴重危害的病源體,代表病原體:流感病毒。其操作必須嚴格控制管理制度執行,以確保實驗
室的安全。
P2實驗室操作規程
1. 目的
加強P2實驗室生物安全管理,規范實驗人員儀器設備、實驗操作行為,確保P2實驗室工作安全運行。
2.適用范圍
適用于P2實驗室的管理與操作。
3.職責
3.1實驗人員:嚴格執行P2實驗室相關管理規定,規范操作行為。
3.2實驗室負責人:監督執行P2實驗室相關管理規定,及時糾正違規操作行為,發現不安全隱患及時上報。
3.3科室負責人:監督并定期抽查P2實驗室管理規定執行情況,及時發現并解決P2實驗室運行中出現的問題。
4.準入要求
4.1 只有經過授權的人員才允許進入P2實驗室工作區。
4.2 16歲以下兒童禁止進入P2實驗室工作區。
4.3 實驗人員要接受相應預防性生物制品的免疫接種。
4.4 禁止將無關動物帶入實驗區。
4.5 外單位人員來訪、參觀、進修,必須經中心主管部門批準,未經批準不得進入P2實驗室工作區。
4.6 外來人員進入P2實驗室,須由本室人員陪同,在嚴格遵守有關規定的條件下方可進入,同時填寫
《外來人員進出實驗室特殊區域登記表》。
4.7 限制免疫耐受者進入實驗室。
4.8 限制正在接受免疫抑制劑者進入實驗室。
4.9 嚴禁在實驗室內吸煙、飲食、化妝等。
5.進入程序
5.1進入P2實驗室,伸手打開緩沖間內空調和生物安全柜按鈕,使實驗室和生物安全柜凈化10分鐘以上。
方可進入實驗室進行實驗。。
5.2將實驗所需材料和物品放入生物安全柜中。
5.3進入P2實驗室緩沖區,關閉外門,在工作服外加穿P2實驗室專用罩衣(緊口,后系帶),戴一次性
口罩、帽子和戴兩層手套, 換穿P2實驗室專用鞋。需要時打開照明按鈕。
5.4進入實驗室工作區,首先打開照明按鈕,打開前玻璃門,調節到要求的高度。將實驗所需物品一次
性放入實驗臺內,擺放要有秩序且要相對區分清潔物與污染物,凈化生物生物安全柜10分鐘左右。
5.5觀察實驗區負壓表指示數值是否在工作要求范圍內,如不能滿足要求則進行負壓調節。觀察溫濕度
計,填寫溫濕度計使用記錄。
5.6實驗人員手臂放進生物安全柜內大約1分鐘后,即可按無菌要求進行實驗操作。
5.7完成整個實驗操作后,將使用過的物品進行分類處理。消毒整個工作臺面,再讓排風至少運行10分
鐘。
5.8放下前玻璃門,打開生物生物安全柜紫外線燈進行毒。
5.9離開實驗操作區前脫去第二層手套放到指定容器內消毒處理。
5.10 填寫儀器使用記錄。
6.實驗后物品、污染物處理
6.1對不可回收的污染物品小心包扎后,在高壓滅菌器內按規定要求進行高壓滅菌處理。然后按醫用垃
圾交中心統一處理。
6.2對可回收的污染物品小心包扎后,在高壓滅菌器內按規定要求進行高壓滅菌處理。之后轉入洗刷間
進行洗刷。
6.3對一次性實驗用品放入容器內高壓滅菌,然后按醫用垃圾交中心統一處理。
6.4對不可高壓滅菌處理的物品,應選擇適當的消毒劑進行浸泡消毒。可回收的物品,送洗刷室;不可
回收的物品,按中心“三廢”處理的有關規定執行。
7.出實驗室程序
7.1打開實驗室內門,出來后隨手關閉。將實驗室專用罩衣脫下,掛在緩沖區,待稍后進行紫外線消毒。
脫掉一次性帽子、口罩和手套,放入待消毒的垃圾筒內,按門鎖按鈕,打開外門,更換拖鞋,打開紫外
線按鈕,同時關閉排風按鈕,然后關閉外門。注:若進入時打開照明,則此時應關閉。
7.2如實驗過程中在傳遞窗傳遞過污染性物品,在實驗后應進行紫外線消毒。
7.3待消毒完畢后(至少30分鐘),關閉生物安全柜和紫外線按鈕。
8.注意事項
8.1 應保持實驗室環境清潔。
8.2 工作臺內部空間需用消毒劑擦洗,如消毒劑具有腐蝕性,要用自來水清洗臺面,以避免腐蝕。
8.3 操作臺內的實驗器具應避免阻擋前后的穿孔網格,并且避免把東西卷入其中。所有的操作應該在距
離前面的格柵約10厘米以內的工作面上進行。
8.4 操作時應動作緩慢,減少不必要的手和手臂伸進和伸出空氣屏障,以免影響氣流。
8.5 工作臺在操作時,應盡量減少實驗室內開門、關門,人員走動等情況,以免影響室內氣流。
8.6 通常情況下,在生物安全柜里面不要使用酒精燈或類似的明火,因為他們會破壞氣流模式、損壞
HEPA過濾器,并且有火災的危險(除非有特殊的要求)。
8.7 警報燈或警鈴響時切勿繼續操作。
8.8 一旦工作臺在操作時出現意外事故,須在這些東西搬出之前,連同工作臺在內進行全面消毒,如果
溢出的污水或液體集中在排液槽中,必須采取緊急措施將污水排出。同時填寫《實驗室潛在危險材料
溢出或淺出記錄》。
8.9試驗結束后將試驗物品移出生物安全柜,不得將生物安全柜當成儲物箱。
9. 維護保養
9.1 當生物安全柜移動后或實驗室布局改動時,應該由有經驗的工作人員對生物安全柜的屏障作用重新
進行測試。
9.2 半年一次生物安全柜內沉降菌檢測:生物安全柜消毒清潔后,紫外線照射30分鐘,開前門通風十分
鐘后,于工作臺面中部均勻放置兩塊已制好、經檢驗無菌的普通營養瓊脂培養皿,打開培養皿蓋,使
培養基表面暴露30分鐘,再將培養皿蓋蓋上后倒置,取出放36℃培養箱培養24小時以上,用肉眼直接
進行菌落計數,以≤1為合格。
9.3 檢查前玻璃驅動裝置的松緊度。
9.4每年請廠商對生物安全柜進行風速、潔凈度檢測一次。
9.5 根據需要更換紫外燈管和照明燈管。殺菌燈工作超過一定時間后會失去效果,當工作臺燈照強度
低于每平方厘米40微瓦時,就應更換新的殺菌燈。(可用紫外線燈表來測定工作臺表面的燈照強度)
9.6 應根據需要更換高效過濾器(HEPA),由專業人員進行操作。(高效空氣過濾器的壽命取決于
如何使用它。在實驗室的正常條件下,可以預測本過濾器至少可以使用五年。)
9.7 在開始工作之前要讓生物安全柜的風機至少運行3-5分鐘使生物安全柜內的空氣進行凈化。
9.8 定期對生物安全柜的工作臺面、內壁(不包括送風濾器擴散板)和觀察窗的內表面用消毒劑
(75%酒精或1g/L有效氯)擦拭。再用無菌蒸餾水進行擦拭以清除殘余的消毒劑。
9.9 注意避免物品或液體進入格柵下面。經常用柔性的清潔劑或玻璃專用清潔劑清洗箱體外表面
和玻璃。
9.10 每月消毒一次工作臺下面的托盤。
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